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伊文思藍(lán)染色液

更新時(shí)間:2024-09-26

簡(jiǎn)要描述:

伊文思藍(lán)染色液( Evans blue漢稱(chēng)偶氮藍(lán),分子式C34H24NNa4O14S4,分子量為96080
CAS號(hào)為314-13-6伊文思藍(lán)與臺(tái)盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料,常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活。

tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)會(huì)用到伊文思藍(lán)染色液( Evans blue漢稱(chēng)偶氮藍(lán),分子式C34H24NNa4O14S4,分子量為96080

CAS號(hào)為314-13-6伊文思藍(lán)與臺(tái)盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料,常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活。

操作步驟:
(一)血腦屏障通透性

1、取處理后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(以小鼠為例,靜脈注射 Evans blue stain(0.5%小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5~1h后處死小鼠

2、腦組織腦組織置于15m離心管中,加入1 m pbs,迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿

3、取上清,加入等量三lu乙酸,4℃孵育。3、取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮,室溫孵育24h 4、離心15min5、取上述溶液,用分光光度計(jì)測(cè)620nm處吸光值OD值)。同時(shí)測(cè)定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的○D值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出待測(cè)待測(cè)樣品的依文思藍(lán)含

(二)活細(xì)胞染色

1、取100μ重懸細(xì)胞到常規(guī)離心管內(nèi),入10oμ Evans blue stair輕輕混勻染色染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng),但不宜超過(guò)10min)
2、吸取少量經(jīng)過(guò)染色后的細(xì)胞。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量,每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù)500個(gè)細(xì)胞,數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。

細(xì)胞存活率計(jì)算公式如下細(xì)胞存活率=(細(xì)胞總數(shù)-藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)x100%

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